На бирже курсовых и дипломных проектов можно найти готовые бесплатные и платные работы или заказать написание уникальных курсовых работ, дипломов, лабораторных работ, контрольных работ, диссертаций, рефератов по самым низким ценам. Добавив заявку на написание требуемой для вас работы, вы узнаете реальную стоимость ее выполнения.

ЛИЧНЫЙ КАБИНЕТ 

 

Здравствуйте гость!

 

Логин:

Пароль:

 

Запомнить

 

 

Забыли пароль? Регистрация

Быстрая помощь студентам

 

Работа № 101261


Наименование:


Курсовик Цитологическая микротехника

Информация:

Тип работы: Курсовик. Предмет: Биология. Добавлен: 28.11.2016. Сдан: 2016. Страниц: 33. Уникальность по antiplagiat.ru: < 30%

Описание (план):


МИНОБРНАУКИ РОССИИ
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
Высшего профессионального образования
БРЯНСИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
ИМЕНИ АКАДЕМИКА И.Г. ПЕТРОВСКОГО


ЕСТЕСТВЕННО-ГЕОГРАФИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
КАФЕДРА БИОЛОГИИ

Зачетная работа
по
«Цитологической микротехнике»




ВЫПОЛНИЛА:
Магистр 1 курса 1 группы ЕГФ
направления «Бология»
очно - заочной формы обучения


БРЯНСК 2016
Содержание
1. Общие правила фиксации диагностируемого гистологического
материала………………………………………………………..1-10
2. Организация работы цитологической лаборатории.
Обязанности персонала………………………………………..11-13
3. Использование цитологического метода в клинике…………14-15
4. Иммуноферментный анализ (ИФА). Организация и
проведение анализа. Варианты ИФА. Прикладное значение.16-23
5. Проточная цитометрия. Особенности организации работы.
Прикладное значение…………………………………………..24-31


1. Общие правила фиксации диагностируемого гистологического
материала.
Фиксация обеспечивает стабилизацию тканевых структур и их уплотнение, прекращает аутолиз, стабилизирует локализацию структур. Механизм действия фиксаторов основан на коагуляции белков и стабилизации липидов. Для достижения этой цели возможны 3 подхода:
1. Высушивание
2. Замораживание
3. Химическая фиксация:
· Альдегиды (формальдегид, глутаровый альдегид)
· хромовая кислота
· тетраоксид осмия
· спирты (этанол, метанол)
· ацетон
· соли ртути (сулема)
· кислоты (уксусная, трихлоруксусная, пикриновая, азотная)
Мы рассмотрим третий вариант. Прижизненно взятая ткань должна быть зафиксирована на протяжении (не больше)30-90 минут, температура фиксатора – 0-4С
Фиксация всегда приводит к большим или меньшим изменениям структуры и объема ткани, степень выраженности которых зависит от рН фиксатора, его концентрации, температуры, продолжительности воздействия и других факторов. Концентрация ионов водорода фиксатора должна соответствовать таковой в тканях, поэтому фиксатор должен иметь рН, близкий к нейтральному. Увеличение температуры фиксатора ускоряет процесс, но вызывает еще большие изменения в тканях. Слишком продолжительная фиксация приводит к значительному уплотнению материала, что в дальнейшем затрудняет его обработку. Для каждого конкретного вида исследования подбирают наиболее приемлемый фиксатор.
Полноценная фиксация материала обеспечивается при соблюдении ряда требований.
1. После вырезки кусочка ткани его немедленно погружают в фиксатор.
2. Объем фиксатора должен превышать объем фиксируемого материала в 10—20 раз, так как тканевая жидкость может существенно изменить концентрацию фиксатора.
3. В том случае, если цвет фиксатора изменяется после погружения в него кусочков ткани, фиксатор необходимо немедленно сменить.
4. Недопустимо повторное использование фиксаторов.
5. Для каждого фиксатора следует соблюдать установленное время фиксации. Длительное пребывание материала возможно лишь в некоторых фиксаторах, например 10 % нейтральном формалине, жидкости Боуэна.
Для фиксации лучше использовать емкости с широким горлом, чтобы не возникло проблем с извлечением фиксированного материала. Равномерность фиксации некоторых рыхлых тканей, например легочной, достигается помещением их на дно банки, а поверх них — прокладки из слоя марли или ваты.
Чаще материал фиксируют при комнатной температуре, но для некоторых видов исследования (гистохимических, электронно-микроскопических и др.) необходимо проводить фиксацию при 4°С. Материал срочных биопсий фиксируют при повышенной температуре фиксатора.
В экспериментальных исследованиях применяют также прижизненный перфузионный метод фиксации и его сочетание с обычным погружением в фиксирующую жидкость.
ПРОСТЫЕ ФИКСИРУЮЩИЕ ЖИДКОСТИ
Химическая фиксация:
· альдегиды (формальдегид, глутаровый альдегид)
· хромовая кислота
· тетраоксид осмия
· спирты (этанол, метанол)
· ацетон
· соли ртути (сулема)
· кислоты (уксусная, трихлоруксусная, пикриновая, азотная)
1. Альдегиды
Можно хранить месяцами, надо всего лишь контролировать рН.
Формалин. Основным, широко применяемым фиксатором служит формалин, представляющий собой 40% раствор формальдегида. Формальдегид – это газ, растворимый в воде до концентрации40% по массе, каким он и поступает в продажу под названием «Формалин». В гистологической практике используют 10% раствор формалина, что соответствует 4% формальдегиду.
Из формальдегида готовят нейтральный (забуференный до рН 7,0) 10—12% формалин.Для этого в банку с 40% формалином засыпают карбонат кальция или магния либо смесь этих солей — доломит из расчета 100 г на 1 л формалина. Для получения 10 % нейтрального формалина через 24 ч к 1 части 40% нейтрального формалина добавляют 9 частей водопроводной воды. Продолжительность фиксации 24—48 ч при 20°С
В водных незабуференных растворах Ф-д со временем превращается в муравьиную кислоту, метиловый спирт и ацетон, которые ухудшают качество фиксации, как и выпадение белого осадка параформальдегида. В результате точную Со Ф-да в растворах формалина установить не представляется возможным. Если на дне банки с 40 % формалином образовался осадок белого цвета (параформальдегид), то его можно растворить, подогрев до 70—80° С (в вытяжном шкафу!), и использовать для фиксации. Очищенный коммерческий параформальдегид применяют как составную часть многих фиксаторов для гистохимических и электронно-микроскопических исследований.
Фиксатор может показывать себя не с лучшей стороны из-за примесей, в основном метанола(до16%).Для этого существуют методы приготовления свободного от метанола
4% ф-д по Гайеру
2гр параформальдегида + 50мл 0,1М фосфатного буфера(рН 7,4-7,6)=нагревают до 70с до просветления раствора, помешивают, охлаждают и фильтруют. Его рН 7,3-7,5.
40% ф-д по Глауерт
готовят 40% параформальдегид(40гр порошка формальдегида + 100мл дистиллированной воды при нагревании до 65С, перемешивая.
+ несколько капель 40%гидроксида натрия до просветления раствора.
Солевой формол.
· Нейтральный 40% формалин 100 мл
· Хлорид натрия 8,5 г
· Водопроводная вода 900 мл
Продолжительность фиксации 48 ч при 20 ° С с последующей промывкой в проточной воде в течение 6—12 ч.
Универсальным фиксатором, пригодным для гистологических и большинства гистохимических исследований, является нейтральный формалин по Лилли).
1. А. 100 мл 40 % формалина + 900 мл дистиллированной воды.
2. Б. 4 г дигидроортофосфата натрия моногидрата (однозамещенного фосфата натрия).
3. В. 6,5 г гидроортофосфата натрия (двузамещенного фосфата натрия)....


Применение
Иммунология:
иммунофенотипирование клеток периферической крови,
определение фагоцитарной активности (захват меченных флюорохромами бактерий или дрожжей),
определение внутриклеточных цитокинов (спонтанная продукция и под действием различных специфических или неспецифических активаторов, таких как ФМА + иономицин, ЛПС, ФНО-альфа),
определение внутриклеточных белков, например транскрипционных факторов GATA-3, T-bet, FoxP3 для дискриминации CD4 Т-лимфоцитов,
определение пролиферативной активности (выявление инкорпорированого бромдезоксиуридина),
исследование клеточного цикла,
оценка клеточной цитотоксичности.
Онкология:
количественный анализ внутриклеточных компонентов (ДНК),
анализ стадий клеточного цикла,
выявление анеуплоидного клона,
определение пролиферативной активности анеуплоидного клона,
определение специфических маркеров,
позволяет проводить наблюдение пациентов, входящих в группу риска,
оценка состояния иммунной системы,
оценка клеточного звена иммунитета (определение субпопуляций лимфоцитов),
оценка функциональной состоятельности иммунокомпетентных клеток (NK тест, фагоцитарный тест и т. п.).
Цитология:
определение цитоморфологической принадлежности клетки размер, соотношение ядро/цитоплазма, степень асимметричности и гранулярности клеток,
оценка активности внутриклеточных ферментов с помощью флуорогенных субстратов,
определение экспрессии поверхностных антигенов,
анализ стадий клеточного цикла,
измерение физиологических параметров клетки (внутриклеточный pH, концентрация свободных ионов Ca2+, потенциал наружной клеточной мембраны).
Гематология:
анализ субпопуляционного состава клеток периферической крови,
подсчет ретикулоцитов, анализ тромбоцитов по специфическим маркерам,
дифференциальная диагностика лимфопролиферативных заболеваний и реактивных лимфоцитозов,
диагностика лимфопролиферативных заболеваний,
диагностика острых лейкозов,
оценка минимальной резидуальной болезни.
Фармакология:
измерение экспрессии маркеров,
измерение активности внутриклеточных ферментов,
определений стадий клеточного цикла в рамках изучения механизмов воздействия различных биологически активных веществ на клеточном уровне.
Растениеводство / Сельское хозяйство:
определение плоидности клеток,
анализ клеточного цикла,
анализ и сортировка протопластов.
В настоящее время проточная цитометрия применяется для выявления определённых клеток в исследуемых образцах (как бактериальных и грибковых, так и собственных клеток организма человека), определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, а также мониторирования состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Выявление бактериальных, грибковых, а также собственных клеток организма в биологических жидкостях крайне важно для диагностики многих заболеваний. В ходе одного из исследований было показано, что проточная цитометрия обладает в 100—1000 раз более высокой чувствительностью по сравнению с микроскопией и позволяет выявлять бактериальные клетки в количестве 10-100 в 1 мл крови. При более низкой концентрации бактерий в образце возможно проведение предварительной инкубации. Высокую чувствительность методу придает использование моноклональных антител, помеченных флуоресцирующим веществом.
Проточная цитометрия позволяет не только выявлять инфицирование микроорганизмами, но и определять спектр их чувствительности, причём, длительность исследования не превышает нескольких часов. Подвергнутые воздействию антибиотиков (invivo или invitro) микроорганизмы сравнивают с контрольными образцами того же штамма для установления их жизнеспособности, а также изменений в нуклеиновых кислотах, белках, оболочке клеток и т. п., что позволяет оценить как степень эффекта антибиотика, так и точку приложения его действия.
Ещё одной областью применения проточной цитометрии является мониторирование состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных лиц путём определения абсолютного количества CD4+ клеток и их доли в популяции лимфоцитов (отношение CD4+/CD8+). Методика может также использоваться для контроля эффективности проводимой терапии.



Перейти к полному тексту работы


Скачать работу с онлайн повышением уникальности до 90% по antiplagiat.ru, etxt.ru или advego.ru


Смотреть похожие работы