Здесь можно найти учебные материалы, которые помогут вам в написании курсовых работ, дипломов, контрольных работ и рефератов. Так же вы мажете самостоятельно повысить уникальность своей работы для прохождения проверки на плагиат всего за несколько минут.

ЛИЧНЫЙ КАБИНЕТ 

 

Здравствуйте гость!

 

Логин:

Пароль:

 

Запомнить

 

 

Забыли пароль? Регистрация

Повышение оригинальности

Предлагаем нашим посетителям воспользоваться бесплатным программным обеспечением «StudentHelp», которое позволит вам всего за несколько минут, выполнить повышение оригинальности любого файла в формате MS Word. После такого повышения оригинальности, ваша работа легко пройдете проверку в системах антиплагиат вуз, antiplagiat.ru, РУКОНТЕКСТ, etxt.ru. Программа «StudentHelp» работает по уникальной технологии так, что на внешний вид, файл с повышенной оригинальностью не отличается от исходного.

Результат поиска


Наименование:


Реферат/Курсовая Использование аффинной хромотографии для оценки качества полимеров на основе природного сырья

Информация:

Тип работы: Реферат/Курсовая. Добавлен: 30.04.13. Год: 2012. Страниц: 12. Уникальность по antiplagiat.ru: < 30%

Описание (план):


Министерство  образования и науки Российской федерации
Федеральное государственное бюджетное образовательное  учреждение высшего профессионального  образования
Омский государственный  технический университет
Кафедра: «Биотехнология»
 
 
 
 
 
 
 
Домашняя  работа по теме:
«Использование  аффинной хромотографии для оценки качества полимеров на основе природного сырья»
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Омск 2012
Содержание:
Введение…………………………………………………………………..3
1.Принцип  метода аффинной хроматографии,  историческая справка и применение………………………………………………………………………4
2.Примеры  применения аффинной хроматографии…………………..10
2.1.Полусинтетическая нуклеаза и комплементарное взаимодействие нуклеотидных фрагментов…………………………12
Список  используемой литературы…………………………………..16 
Введение

 
Макромолекулы, такие, как белки, полисахариды и нуклеиновые кислоты, внутри своих индивидуальных групп отличаются по физико-химическим свойствам лишь незначительно; поэтому их выделение, основанное на различиях в этих свойствах, например, с помощью ионообменной хроматографии, гель-фильтрации или электрофореза сопряжено с известными трудностями и требует много времени. Вследствие этого в ходе выделения существенно падает их активность из-за денатурации, расщепления, ферментативного гидролиза и т. п. Одним из наиболее характерных свойств этих биологических макромолекул является их способность обратимо связывать другие вещества. Например, ферменты образуют комплексы с субстратами или ингибиторами, антитела - с антигенами, а нуклеиновые кислоты, такие, как информационная РНК, гибридизуются с комплементарными ДНК и т. д. Образование специфических диссоциирующих комплексов биологических макромолекул служит основой метода их очистки, известного как аффинная хроматография.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
    Принцип метода аффинной хроматографии, историческая справка и применение
 
Аффинная  хроматография (или, более точно, биоаффинная  или биоспецифическая по сродству хроматография) основана на исключительной способности  биологически активных веществ связывать  специфически и обратимо другие вещества, называемые в общем случае лигандами  или аффинными лигандами, или  упрощенно аффинантами.
Если приготовить нерастворимый аффинант (обычно это делают путем ковалентной привязки к нерастворимой подложке) и раствор, содержащий биологически активные продукты, которые необходимо выделить, пропустить через колонку с этим аффинантом, то все соединения, которые в данных условиях эксперимента не обладают сродством к аффинанту, будут проходить не задерживаясь, а продукты, обнаруживающие сродство к нерастворимому аффинному лиганду, будут сорбироваться на колонке. Последние могут быть освобождены далее из комплекса с иммобилизованным лигандом, например, с помощью раствора растворимого аффинанта или путем изменения состава растворителя. Диссоциация комплекса часто может быть достигнута изменением рН, ионной силы или температуры либо с помощью специфических агентов, как это будет показано далее. Согласно О'Карра и др, следует различать биоспецифическую десорбцию и небио- специфическую десорбцию с помощью так называемых «деформирующих буферов», как показано схематически на рис.
Рис.1. Схема биоспецифической адсорбции (Л), элюирования «деформирующим» буферным раствором (Б) и биоэлгоирования растворимым конкурентным лигандом (В).
 Инг — иммобилизованный ингибитор; L — конкурентный лиганд.
 
Аффинная хроматография  как метод, по-видимому, впервые была применена Штаркенштайном в 1910 г. для выделения ?-амилазы с помощью нерастворимого субстрата (крахмала). Принцип аффинной хроматографии, использующий аффинанты, ковалентно связанные с нерастворимой матрицей, известен более 20 лет. Кемпбелл и др, были, вероятно, первыми (1951 г.), в чьих работах этот принцип получил практическое приложение для выделения антител на колонке с целлюлозой с ковалентно присоединенным антигеном. Для выделения ферментов аффинная хроматография впервые была применена в 1953 г. Лерманом, который выделил тирозиназу на колонке с целлюлозой, эфирно связанной с остатками резорцина. В последующие годы аффинная хроматография использовалась весьма редко, что очевидно, обусловлено свойствами известных в то время нерастворимых подложек, которые ограничивали возможности образования комплексов между выделяемыми продуктами и присоединенными аффинантами. На подложках с гидрофобными или ионогенными группами часто наблюдалась неспецифическая сорбция.
Однако  наблюдается широкое развитие метода. Толчком послужило открытие Поратом  присоединения аффинанта к агарозе, активированной бромцианом.
        Куатреказас и Анфинсек показали, что агароза (наиболее распространенная продажная форма сефарозы) обладает почти всеми характеристиками идеального носителя. В 1968 г. Куатреказас и др. успешно применили аффинную хроматографию для выделения нуклеазы, химотрипсина и карбоксипептидазы А и предложили термин «аффинная хроматография». Далее развитие метода шло в основном в направлении его применения для выделения ферментов, их ингибиторов, антител и антигенов, нуклеиновых кислот, транспортных и репрессорных белков, гормонов и их рецепторов и др.
Использование аффинной хроматографии тем не менее  не ограничивается только выделением биологически активных веществ. Уже  в 1960 г. Яги и др. описали определение  небольших количеств антител  с помощью нерастворимых носителей  с привязанными антигенами. Иммобилизованные олигомеры политимидиловой кислоты использовали Эдмондс и др. для количественного определения полиадениловой кислоты. Аффинная гель-фильтрация как микрометод при экспрессных определениях молекулярных масс дегидрогеназ основана на исключении последних из гелевой среды с варьируемым размером пор; метод описан Лоу и Дином.
По своей сути аффинная хроматография - идеальный метод  для изучения взаимодействий в биохимических  процессах. Иммобилизованная лейцил-тРНК-синтетаза  использована как для выделения  изолейцил-тРНК, так и для изучения взаимодействия белка с нуклеиновой  кислотой. Взаимодействия пептидов с  белками и нуклеотидов с аминокислотами и пептидами также изучены этим методом.

Рис.2. Элюирование изоферментов лактатдегидрогеназы вогнутым градиентом NАDН.
0,2 мл образца белка  (0,2 мг) в растворе, содержащем 0.1 М  Na-фoсфатный буфер (рН~7.0), 1 мМ ?-меркаптоэтанол и 1 М хлорид натрия, нанесены на колонку зой со связанным аналогом АМР <140x8 мм, содержащую 2,5 г влажного геля), уравновешенную 0.1 М Nа-фосфатным буфером (рН~7,5); затем колонка промыта 10 мл используемого буферного раствора, изоферменты элюированы вогнутым градиентом NADН (от 0,0 до 0.3 ммоль/л) в буферном растворе 1 мМ ?-меркаптоэтанола. Объем фракция 1 мл; скорость потока 3,4 мл/ч.
 
Кроме того, метод применен для исследования механизмов ферментативных процессов и выяснения структур молекул. Аканума и др применили его для изучения связывающего участка бычьей карбоксипептидазы В, исследуя комплексообразование с иммобилизованными субстратными аналогами основных и ароматических аминокислот. Используя аффинную хроматографию, Дилени и О'Карра показали, что оксалоацетат ингибирует лактатдегидрогеназу путем образования тройного непродуктивного комплекса с комплексом фермент – NAD+, а не с комплексом фермент - NАDН, как предполагалось первоначально. Аффинная хроматография оказалась весьма полезной при изучении кинетики активации трипсиногена. Молекулярная структура интерферонов фибробластов и лейкоцитов человека изучена с помощью аффинной хроматографии Янковским и др.
Для разделения изоферментов лактатдегидрогеназы  Броделиус и Мосбах использовали сефарозу с присоединенными аналогами АМР; при элюировании растворами с возрастающей концентрацией NАDН получены пять пиков изоферментов (рис.2). Разделение достигается благодаря различиям в константах диссоциации Кдис двойного комплекса фермент - NАDН. Позднее Броделиус и Мосбах аналогичным образом хроматографировали ряд лактатдегидрогеназ нз различных источников, константы которых известны.
 

Рис. 3. Зависимость константы диссоциации бинарных комплексов фермент - NADН.
Лактатдегидрогеназы: 1 - Н4 быка; 2 - Н4 свиньи; 3 - М4 быка; М4 — кролика; 6 — М4 свиньи.
 
Рис. 3. иллюстрирует прямую пропорциональность Кдис от элюирующей концентрации NADН. Линейность указывает, что в данном случае константы диссоциации комплексов фермент - NADН играют более важную роль, чем константы диссоциации комплексов фермента с иммобилизованным аффинным лигандом (АМР). Таким образом, появилась возможность определения констант диссоциации двойных комплексов фермента с NADН; метод основан на установлении элюирующих концентраций NADН. Не обнаружено различий в величинах Кдис при использовании как кристаллических, так и неочищенных препаратов ферментов. Другие белки, присутствующие в неочищенных препаратах, даже если они связывались колонкой, не влияли на картину элюирования. Это обстоятельство создает огромное преимущество таких определений по сравнению с обычными методами определения констант диссоциации, которые требуют не только чистых ферментов, но также и гомогенных изоферментов. Другим преимуществом является большая быстрота и расход очень небольших количеств фермента для каждого определения.
Использование аффинной хроматографии для определения, например, констант ингибирования ферментов, по-видимому, весьма перспективно. Данные об объемах элюатов, содержащих фермент, на колонке с иммобилизованным ингибитором, полученные при использовании различных концентраций ингибитора в растворе, позволяют определить константы ингибирования как для связанного ингибитора, так и для ингибитора в растворе. Большое преимущество этого метода состоит в том, что при использовании одного и того же ингибитора как для иммобилизации, так и для элюирования можно непосредственно сделать выводы о влиянии связей с носителем и природы носителя на изучаемое взаимодействие на основании совпадения или различий в определяемых величинах констант диссоциации. Следовательно, метод аффинной хроматографии открывает новые возможности не только для изучения взаимодействия биологически активных веществ, он перспективен также и для выяснения влияния микроокружения на образование этих комплексов.
 
    Примеры приме
    и т.д.................


Перейти к полному тексту работы


Скачать работу с онлайн повышением оригинальности до 90% по antiplagiat.ru, etxt.ru


Смотреть полный текст работы бесплатно


Смотреть похожие работы


* Примечание. Уникальность работы указана на дату публикации, текущее значение может отличаться от указанного.