На бирже курсовых и дипломных проектов можно найти образцы готовых работ или получить помощь в написании уникальных курсовых работ, дипломов, лабораторных работ, контрольных работ, диссертаций, рефератов. Так же вы мажете самостоятельно повысить уникальность своей работы для прохождения проверки на плагиат всего за несколько минут.

ЛИЧНЫЙ КАБИНЕТ 

 

Здравствуйте гость!

 

Логин:

Пароль:

 

Запомнить

 

 

Забыли пароль? Регистрация

Повышение уникальности

Предлагаем нашим посетителям воспользоваться бесплатным программным обеспечением «StudentHelp», которое позволит вам всего за несколько минут, выполнить повышение уникальности любого файла в формате MS Word. После такого повышения уникальности, ваша работа легко пройдете проверку в системах антиплагиат вуз, antiplagiat.ru, etxt.ru или advego.ru. Программа «StudentHelp» работает по уникальной технологии и при повышении уникальности не вставляет в текст скрытых символов, и даже если препод скопирует текст в блокнот – не увидит ни каких отличий от текста в Word файле.

Результат поиска


Наименование:


курсовая работа Выделение, индикация и идентификация возбудителя лейкозу крупного рогатого скота

Информация:

Тип работы: курсовая работа. Добавлен: 06.06.2012. Сдан: 2011. Страниц: 11. Уникальность по antiplagiat.ru: < 30%

Описание (план):


    Введение
         Лейкоз  КРС - хроническая инфекционная болезнь  опухолевой природы, основной признак которой - злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетками или появляются опухоли.
         Лейкозы животных диагностируют почти во всех странах мира. Наиболее широко они распространены в США, ряде стран  Центральной Европы, Дании, Швеции и  странах Ближнего Востока. Потери от выбраковки туш с опухолевым лейкозом в США в 1978 г оценивали в 7 млн. долларов. Эта сумма не отражает реальных потерь, поскольку не учитывает ущерб от падежа и вынужденного убоя заболевших животных непосредственно на фермах. Экономический расчет показал, что в Великобритании потери от лейкоза за 25 лет могут составить 4,8 млн.фунтов стерлингов. В Турции, куда лейкоз был завезен с племенным скотом из Швейцарии, количество больных животных составило 4,5%. Лейкоз установлен также в Африке и Австралии. В нашей стране возникновение лейкоза связано с завозом племенного скота в 1945-1947 гг. из Германии.
         Симптомы  и патологоанатомические  изменения. Различают 2 основные формы лейкоза КРС: энзоотическую и спорадическую. Последняя форма встречается редко и поражая молодых животных (до 3-летнего возраста), проявляется клинико-морфологическими разновидностями: 1) ювинальный лейкоз (форма лейкоза у телят) - наиболее часто наблюдается у телят моложе 6-мес возраста, характеризуется увеличением лимфатические узлов и часто инфильтрацией костного мозга, 2) тимусная форма лейкоза встречается у телят моложе 2-летнего возраста, характеризуется увеличением тимуса, 3) кожная форма встречается у телят от 1 до 3-летнего возраста, характеризуется узелковой лейкемической инфильтрацией кожи.
         Спорадический лейкоз не представляет особого интереса в экономическом плане. Этиологический агент при этой форме болезни не выявлен.
         Энзоотический лейкоз - контагиозная болезнь с  длительным латентным периодом, во время которого в крови выявляют вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) и AT к нему. В основном встречается у крупных животных, наиболее часто в возрасте 5-8 лет. Болезнь характеризуется пролиферацией неопластических элементов, в результате чего образуются отдельные опухолевые массы и (или) диффузная инфильтрация различных тканей и органов. В опухолевый процесс вовлекаются лимфатические узлы, часто поражаются селезёнка, сычуг, сердце, почки и другие органы. Клинические проявления зависят от вовлечённых в патологический процесс органов, степени опухолевого роста и диссеминации неопластиче.
         Энзоотический лейкоз КРС объединяет две группы болезней. Опухолевые болезни первой группы характеризуются инфильтрацией лимфоцитами органов кроветворения с вовлечением в патологический процесс костного мозга (лимфоидный, миелоидный, слабо дифференцированный и недифференцированный лейкозы с различными вариантами). Болезни второй группы (лимфо-, ретикулосаркома, лимфогранулематоз) сопровождаются опухолевым ростом, первично проявляющимся в лимфоидной ткани (лимфатических узлах, селезенке и других органах). Типично протекающий энзоотический лейкоз в терминальной стадии характеризуется потерей массы, анемией, снижением молочной продуктивности и увеличением одного или нескольких периферических лимфатических узлов. Заболевание неизменно заканчивается смертью животного через несколько недель или месяцев после проявления клинических признаков.
         Патогенез. Патогенез при лейкозе коров изучен недостаточно, АГ вируса обнаруживают только в лимфоцитах инфицированных животных после краткосрочного культивирования in vitro. Считают, что лимфоцитоз - результат поликлональной пролиферации В-лимфоцитов, постоянно стимулированных АГ ВЛКРС. Сравнительный анализ результатов изучения интерфероногенеза лейкоцитами крови у здорового, свободного от ВЛКРС, спонтанно инфицированного вирусом лейкоза с картиной крови в пределах физиологической нормы, а также больного хроническим лимфоидньм лейкозом (ХЛЛ КРС), показал, что титры лейкоцитарного ингерферона в крови спонтанно инфицированных животных снижены в 1,3-2,9, a y больных ХХЛ- в 3,8-9,4 раза по сравнению с клинически здоровыми, свободными от ВЛКРС животными Проведенные исследования показывают, что ВЛКРС обладает иммунодефицитными свойствами, выраженными в данном случае снижением интерфероногенеза в лейкоцитах крови. 
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     
     

    Обзор литературы
         Устойчивость. Установлено, что ВЛКРС чувствителен к температурным возденет разрушается при повторных замораживаниях и оттаиваниях и при нагревании до 56°С в течение 15 мин. Пастеризация молока (74°С в течение 16с) разрушает его, и он теряет инфекционность для ягнят. Вирус обнаруживается в молоке после хранения в течение 72 ч. при 1°С, при 10 и 14,5°С его не обнаруживают через 48 и 24 ч соответственно. Полная инактивация вируса в молоке или вируссодержащей жидкости установлена при 50°С в течение 70 мин., при 70-74 °С в течение 17 мин. или при 56-63 °С в течение 5-30 мин. В цельном молоке, хранившемся при 1,1-5,5°С, происходит постепенное снижение титров ВЛКРС в течение 72 ч; при 9,9 и 14,4°С вирус не обнаруживался уже через 48 и 24 ч хранения. В сливках, собранных после отстоя цельного молока, при 1,1°С через 24, 48, 72 ч вирус был выделен только в пробах первых 2-х сроков отстоя. В разбавленном молоке (до 37,5 %) инфекционность сохраняется в течение 12 ч. Если при рН 6,5 вирус сохраняется в молоке в течение 72 ч, то при рН 7,1- только 48 ч. Снижение кислотности молозива до рН 4,5 разрушает вирус в течение 2 ч, особенно при высоких исходных титрах, а в нативном молозиве вирус сохранялся в течение 18 дн. при комнатной температуре. Прямой солнечный свет инактивирует ВЛКРС в течение 4 ч, УФ лучи - в течение 30 мин (120 Вт на расстоянии 1 м ). ВЛКРС полностью теряет активность в р-рах натриевого щелока (0,5° мин, 22°С), этанола (2,0%, 4 ч, 22°С), формальдегида (0,5%, 8 ч, 37°С), фенола (0,5%, 4°С). В жидком азоте лимфоциты, несущие провирусную ДНК, сохраняют инфекционность в течение нескольких лет. Повторное замораживание и оттаивание разрушает клетки и устраняет инфекционность.
         Антигенная  структура. Электрофорез очищенных вирионов ВЛКРС в SDS - ПА и гельфильтрация в присутствии гидрохлорида гуанидина показывают в составе вирионов 4 главных негликозилированных белка и 2 гликозилированных.
         Антигенная  вариабельность. В АГ отношении ВЛКРС отличается от известных вирусов типа С. Не выявлено с помощью ИФ и иммунодиффузии АГ родства между главным внутренним белком ВЛКРС р24 и группоспецифическими АГ вирусов лейкозов мышей и кошек, опухолей молочных желез мышей, вирусов бабуинов, шерстистых обезьян ВЛКРС, являясь экзогенным ретровирусом КРС, отличается от известных ретровирусов по АГ свойствам, морфогенезу, способности индуцировать синцитий в монослойных культурах клеток и по свойствам ревертазы. Кроме того, в отличие от большинства других лейкемогенных вирусов, он присутствует у инфицированных животных в непродуктивном состоянии.
         Локализация вируса, вирусоносительство. ВЛКРС обнаруживается в клетках молозива и молока естественно зараженных животных. Из слюны, носовых истечении, мочи и спермы инфицированных животных его выделить не удалось. Экспериментально и спонтанно зараженный до или после рождения теленок остается инфицированным всю жизнь, несмотря на постоянное присутствие ВНА, выявляемых в РДП, РСК и других серологических реакциях. Отсутствие экспрессии генома ВЛКРС при наличии транскрипционных противирусов в опухолевых клетках дало возможность предположить, что причиной опухолевой трансформации клеток ВЛКРС является нарушение структуры клеточного генома. Неспособность AT элиминировать ВЛКРС объясняется тем, что этот вирус обычно присутствует в инфицированных лимфоцитах в непродуктивном состоянии и защищен от действия AT. Размножение его не является необходимым для распространения в популяции животных. Инфицированные лимфоидные клетки могут передавать вирусный геном потомству во время размножения клеток.
         Антигенная  активность. Инфицированные ВЛКРС животные вырабатывают AT к нескольким вирионным АГ. Впервые для выявления АГ этого вируса в цитоплазме продуцирующих вирус лимфоцитов КРС был использован метод непрямой ИФ с использованием сыворотки больного лейкозом КРС. В дальнейшем было показано, что выявляемый этим методом АГ является вирионным компонентом, несущим АГ детерминанты, присутствующие в главном внутреннем вирионом белке р24. В сыворотке крови больных лейкозом коров обнаружены КСА, к 4-м вирусным полипептидам: р15, р24, gp30, и gp51. В сыворотке крови телят и ягнят, родившихся от больных лейкозом животных, имеется высокий уровень специфических антител, сохраняющийся в течение 5-6 мес. после рождения у телят и 3 мес. у ягнят. Наличие высокого титра колостральных антител способно нейтрализовать инфекции ВЛКРС и предотвратить заражение новорожденных телят при условии их содержания раздельно от больных коров. Антитела вырабатываются преимущественно на структурный белок gp51 и относятся к IgC, IgA и IgM. Наличие AT не предотвращает развития опухолей.
         Культивирование. Вирус лейкоза впервые удалось обнаружить в краткосрочных культурах лимфоцитов крови инфицированных животных. ВЛКРС репродуцируется в перевиваемых хронически инфицированных культурах клеток тканей животных разных видов. Наибольшее распространение в мире получила перевиваемая линия клеток FLK-BLV, которую получил в 1974 г. Van der Maaten путём культивирования эмбриональных клеток почки овцы с лимфоцитами лейкозной коровы. Эта линия клеток используется для биохимических, морфологических и серологических исследований.
         В настоящее время получены и широко используются перевиваемые хронически инфицированные ВЛКРС линии клеток: фибробласты легкого эмбриона коровы (АИД-15), почки эмбриона коровы (ПЭК); почки эмбриона овцы (FLK-BLV); легкого эмбриона летучей мыши (T61-Lu); легкого макаки-резус (BLV-Simian); селезенки овцы (FLS, J-1228); тимуса эмбриона коровы (ТЭК-МВА-766 LmTT).
      Способность ВЛКРС индуцировать в монослойных куътурах клеток образование синцитиев (многоядерных клеток) была использована для разработки специфичного, чувствительного и быстрого диагностического теста для вьывления инфекционного вируса и ВНА. Этот тест обеспечивает количественные результаты и успешно применяется для прямого выявления ВЛКРС - инфекции у КРС и животных других видов.
         ГА  свойства. ВЛКРС агглютинирует только эритроциты мышей. Максимальная ГА наблюдается при рН 6 и температуре 4°С. После обработки вируса тритоном Х100 или ультразвуком ГА активность вируса повышается в 6-16 раз. Обработка трипсином, KI04 или нейраминидазой значительно снижает ГА-активность ВЛКРС. Эти данные указывают на то, что ГА ВЛКРС является гликопротеином gp51, который после очистки обладает высокой ГА- J активностью. Обработка мышиных эритроцитов нейраминидазой в 4 раза повышает их способность агглютинироваться.
         Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лейкозом животные. В естественных условиях инфекция ВЛКРС может передаваться пренатально и постнатально. Механизм пренатальной передачи включает передачу вирусного генома через гаметы (генетическая и хромосомная трансмиссия) и передачу целого вируса (эпигенетическая или экстрахромосомная трансмиссия). Постнатальная передача включает передачу вируса через молоко или при контакте. Контактная передача может быть результатом прямого воздействия контаминированных вирусом секретов или экскретов или переноса вируса, насекомыми или контаминированными объектами. ВЛКРС может персистировать в лейкоцитах клещей и переноситься ими на здоровых животных. Пренатальная передача ВЛКРС не превышает 20 случаев. Вирус передается от матери плоду трансплацентарно, во время последних 6 мес. внутриутробной жизни, а не через половые клетки.
         Однако  основным путем распространения инфекции в естественных условиях является контактная передача. Так как частицы ВЛКРС не продуцируются in vivo, то логично предположить, что в большинстве случаев вирус передается с инфицированными лимфоцитами. Для заражения коровы достаточно ввести внутрикожно 2500 лимфоцитов крови. Учитывая возможность переноса ВЛКРС ничтожным количеством крови, следует иметь в виду, что при не соблюдении элементарных санитарных правил инфекция может распространяться во время выполнения ветеринарных процедур со шприцами, иглами и другими хирургическими инструментами, контаминированными кровью. Следовательно, при массовом взятии крови, вакцинации, туберкулинизации и других мероприятиях для каждого животного необходимо использовать отдельный стерильный инструмент. Несоблюдение этого правила резко повышает инфицированность животных неблагополучных хозяйств. Имеются косвенные доказательства того, что распространение инфекции ВЛКРС может осуществляться насекомыми. В тропических зонах, например в Венесуэле, где распространены кровососущие насекомые, пораженность лейкозом особенно высока.
         ВЛКРС или инфицированные им лимфоциты  присутствуют в молоке большинства  инфицированных животных. Однако, несмотря на то, что молоко и молозиво инфицированных коров содержат вирус, инфекция новорожденным телятам в естественных условиях передается редко по сравнению с контактным заражением. Устойчивость телят, вскормленных инфицированными коровами, к ВЛКРС в течение первых месяцев жизни обусловлена, вероятно, материнскими ВНА, которые приобретают все телята, получающие молозиво. Если теленок заражен ВЛКРС во внутриутробный период, то колостральные AT не влияют на персистенцию вируса. В зависимости от уровня AT в молозиве, материнские AT исчезают в течение 4-6 мес. после рождения. Внутриутробная передача вируса лейкоза обнаружена у 4 из 50 обследованных новорожденных телят. По мнению авторов, возникновение передачи вируса лейкоза не оказывает существенного влияния на эпизоотологию данной инфекции, чем обосновывают нецелесообразность использования серопозитивных коров в системе противолейкозных мероприятий.
         В сперме инфицированных быков ВЛКРС не выявлен. Однако, у быков с воспалением генитального тракта могут быть в сперме лимфоциты, инфицированные ВЛКРС. Экспериментально установлено, что коров можно инфицировать путем нанесения таких лимфоцитов на слизистую оболочку матки. Таким образом, в случае наличия ВЛКРС в сперме инфицированных быков исключена передача вируса от быка корове. Вместе с тем, различий в частоте проявления инфекции среди потомства ВЛКРС положительных и ВЛ КРС отрицательных быков не выявлено. Механизм контактной передачи ВЛКРС не ясен, поскольку не установлено наличие вируса в фекалиях, моче и слюне инфицированных животных. Парентеральное введение подопытным животным слюны, выделений из носа, проб выдыхаемого воздуха и мочи инфицированных животных не вызывало депрессии. Исследованиями, проведенными в динамике опыта, было установлено, что через 60 сут. после прекращения выпаивания молока у 2-х кроликов в сыворотке крови были выявлены антитела к ВЛКРС в РИД, а через 90 сут. еще 5 кроликов были серопозитивными. На морских свинках не удалось установить факт передачи ВЛКРС через молоко. Опытные животные, которым выпаивали молоко, термически обработанное и контрольные были серонегативными на протяжении всего срока наблюдения. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что молоко является фактором передачи ВЛКРС. В основном инфекционный процесс у КРС ограничивается 2-мя стадиями: инкубационной и бессимптомного вирусоносительства. Только у небольшого процента 5-7 взрослых животных устанавливают 3-ю и 4-ю стадии: клинико-гематологическое и опухолевое проявление, характерные для лейкоза.
         При лейкозе КРС рассматривают 2 пути передачи вируса: неонатальный (внутриутробный) и постнатальный (горизонтальный). Сероэпизоотологические исследования, проведенные на 62 тыс. зараженных ВЛКРС и 47 тыс. здоровых коров, показали, что вертикальный путь не оказывает существенного влияния на эпизоотический процесс. Горизонтальный (контактный) путь является основным в эпизоотическом процессе. В стадах с зараженностью коров-матерей ВЛКРС в пределах 11,3-33,1% широкомасштабными сероэпизоотологическими исследованиями 6 – мес. телят (118 тыс.) в РИД выявляли сравнительно невысокий уровень AT носительства (2,1-4,8%). Одновременно установлено, что в оздоровленных от инфекции ВЛКРС стадах методом постепенной замены зараженных коров серонегативными собственной репродукции первотелками, у последних более 57% матерей положительно реагировали на ВЛКРС.
         Диагностика. Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патанатомических изменений и результатов лабораторных исследований, которые включают гематологические и гистологические, а также серологические исследования.
         Все формы лейкоза характеризуются  увеличением в различной степени лимфатических узлов. При лимфолейкозе они увеличены равномерно, не сращены с окружающими тканями, капсула снимается легко, на разрезе узлы серо-белого цвета, сочные и саловидные. Лимфатические узлы при лимфогранулематозе, лимфосаркоме и гистиоцитарной саркоме бугристые, капсула сращена с паренхимой, на разрезе часто обнаруживают кровоизлияния и некрозы, в органах брюшной, тазовой полостей, на серозных оболочках отмечают опухолевые разрастания узлов в виде конгломератов серо-белого, желто-серого цвета. Селезенка при лимфоидном, слабодифференцированном и миелоидном лейкозах увеличена. При первых 2-х формах она буро-красного цвета с четко выраженной красной и белой пульпой за счет гиперплазии фолликулов. В более поздней стадии болезни граница между белой и красной пульпой стерта. При миелоидном лейкозе селезенка красно-малинового цвета, фолликулы плохо заметны, а в отдельных участках отсутствуют, ткань рыхлой консистенции с кровоизлияниями. При лимфоретикулосаркоме селезенка не увеличена. При всех формах лейкоза отмечают очаговые или диффузные разрастания серо-белого или серо-розового цвета в печени, почках, толще сердечной мышцы, органах пищеварения, матке, скелетных мышцах, диафрагме и других органах.
         Взятие  и подготовка материала. Для гематологического исследования кровь берут из яремной вены в пробирки с антикоагудянтом - 10 %-ном раствором динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, трилон В) из расчета 0,02 мл раствора на 1 мл крови. Не разрешается брать кровь от животных за 15 дней до отела и 15 дней после него. Для серологического исследования кровь берут от животных в возрасте 6 мес. и старше В лабораторию в термосе со льдом направляют 5-6 мл сыворотки Для гистологического исследования кусочки пораженных органов (селезенки, лимфатических узлов, грудной кости, печени, почек, легких, сердца и правого ушка сердечной мышцы, стенки сычуга, матки и скелетных мышц) посылают в свежем виде в термосе со льдом или в 10%-ном растворе формалина. 

    Индикация и идентификация  вируса.                         
                                                                                                                                            Для определения вируса в различных материалах используют методы, позволяющие выявлять инфекционный вирус или вирусные АГ.Являясь типичным ретровирусом, ВЛКРС находится у инфицированных животных в форме провирусной ДНК, которую можно выявить в лимфоцитах крови с помощью ПЦР или методами гибридизации нуклеиновых кислот При культивировании инфицированных клеток вирус можно выявить с помощью электронного микроскопа или по образованию синцития в соответствующих индикаторных культурах.
         Электронно-микроскопический метод. Позволяет выявлять вирусные частицы в краткосрочных культурах лейкоцитов крови животных, инфицированных ВЛКРС, и в монослойных культурах клеток, сокультивированных с инфицированными лимфоцитами. По некоторым данным, лейкоцитарные культуры (лейкоциты крови больных коров) через 48-72 ч представлены разнообразными клетками, среди которых находили лимфоциты и лимфобласты, продуцирующие вирусные частицы типа С. Зрелые вирионы имели ультраструктуру, типичную для онковируса типа С. Вирусные частицы находили, в основном, в межклеточных пространствах и на внешней мембране лимфоидных клеток. Методом ЭМ у больных лейкозом животных обнаруживают в лимфоцитах ядерные "карманы" в виде неправильного кольца и петли. Как правило, они обладают связью с оболочкой ядра и содержат цитоплазматическое вещество клетки. Иногда центральная часть их заполнена электроннолотными гранулами диаметром 4 нм, расположенными группами и напоминающими гранулы гликогена. Ядерные "карманы" отсутствуют в дифференцированных гранулоцитах, моноцитах и плазматических клетках, в одном лимфоците их обнаруживают 1-5 и более.
         Тест  синцитиеобразования. ТСО применяется для выявления инфекционного вируса в различных материалах и основан на способности ВЛКРС образовывать синцитии в некоторых нетрансформированных монослойных культурах клеток и в трансформированных перевиваемых культурах клеток. Метод предложен для титрования ВЛКРС с использованием кошачьей линии клеток S+L. Показано, что инокуляция клеток вирусом лейкемии КРС приводит к образованию крупных многоядерных синцитиев, которые выявляются при окрашивании монослоя. Метод можно использовать для титрования вируса, так как имеется прямо пропорциональная зависимость между уменьшением количества синцитиев и разведением вирусной суспензии. Метод является воспроизводимым, специфическим и чувствительным. Рекомендуют микромодификацию метода количественной титрации инфекционного ВЛКРС, основанную на определении количества синцитиев в культуре эмбриональных клеток теленка, культивированной с лимфоцитами, зараженными вирусами лейкемии КРС, или в присутствии вируса. Отмечена линейная зависимость между числом инокулированных в культуре клеток зараженных вирусом лейкоцитов и количеством индуцированных синцитиев. При сравнении чувствительности макро- и микрометода титрации число синцитиев в микрокультуре статистически не отличалось от числа синцитиев, индуцированных в макрокультуре. Метод сокультивирования используется для выявления инфекционного ВЛКРС. Суть его состоит в культивировании лимфоцитов крови и чувствительных клеток монослойной культуры с последующим выявлением АГ ВЛКРС с помощью ТСО, РИД или ИФА.
         РДП (РИД). Это относительно чувствительный тест для выявления гликолротеина ВЛКРС Позволяет выявлять гликопротеин вируса в концентрации 0,4 мкг/мл.
         Биопроба. Инфицированных животных можно выявлять путем постановки биопробы на овцах. С этой целью овцам обычно внутрибрюшинно вводят цельную кровь испытуемого животного. При наличии в пробе крови вируса у овцы развивается инфекция, сопровождающаяся образованием вирусспецифических AT. AT у зараженных овец выявляют в РДП с гликопротеинным  АГ через 3-6 недель.
         Реакция бласттрансформации. Хронический лимфоидный лейкоз КРС характеризуется слабой реакцией бласттрансформации (РБТЛ). Поэтому у животных, подозрительных по заболеванию лейкозом по показателям лейкоцитов крови, проводят РБТЛ в культуре лимфоцитов крови Показатель РБТЛ выражает процент трансформировавшихся лимфоцитов (переходные клетки, бласты, митозы) и определяется после подсчета не менее 1000 клеток культуры У клинически здоровых и с нормальной гемограммой коров, по данным большинства исследователей, он составляет в среднем 60% (40-90%), у больных лимфолейкозом РБТЛ значительно снижена уже в субклинической стадии При повышенном содержании в крови общего количества лейкоцитов исследуют животных в РБТЛ Диагноз на лимфолей-коз считают подтвержденным при показателе РБТЛ не выше 35%. Если он выше, то постановку реакции повторяют с интервалом 3 мес. у тех животных, у которых нарастают гематологические изменения.
         Гематологический  метод. Основан на обнаружении в периферической крови повышенного количества лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабодифференцированных клеток (родоначальных, пролимфоцитов, лимфобластов). Количество лейкоцитов подсчитывают с помощью электронного счетчика частиц или в камере Горяева и выводят лейкоцитарную формулу. Животных, подозрительных по заболеванию лейкозом, подвергают дополнительньм гематологическим исследованиям с интервалом 2-3 мес. до получения 2-х подряд качественно одинаковых результатов, по которым их признают здоровыми или больными лейкозом.
         Следует иметь в виду, что некоторые  острые и хронические болезни  КРС (перикардиты, ретикулиты, гепатохолангиты, циррроз печени, туберкулез, бруцеллез и др. ) могут сопровождаться лейкоцитозом. При этом в отличие от лейкоза увеличение количества лейкоцитов крови происходит, в основоном, за счет найтрофилов, эозинофилов или моноцитов. 
     

    Таблица 2. Число лейкоцитов в 1 мм3 крови здорового, подозрительного по заболеванию и больного лейкозом КРС 

Возраст животных (лет) Число лейкоцитов у здоровых Абсолютное  число лимфоцитов у подозрительных Абсолютное  число лимфоцитов у больных
От 2 до 4 До 11000
    От 8000 до 10000
    Свыше 10000
От 4 до 6 До 10000
    От 6500 до 9000
    Свыше 9000
Старше 6 До 9000
    Oт 5500 до 8000
    Свыше 8000
 
         Эти изменения крови имеют временный  характер, их дифференцируют от лейкоза  повторными гематологическими исследованиями. Разработана методика выделения  мононуклеарных клеток из периферической крови инфицированного КРС и их культивирования репродукции инфекционного вируса лейкоза. Метод позволяет получать максимальный с инфицированных вирусом лейкоза лимфоцитов. Из 10 мл цельной крови получают примерно 107 мононуклеарных клеток. Чтобы максимизировать продукцию вирионов и вирус) АГ, к культуре лимфоцитов добавляют Кон-А в конечной концентрации 5 мг/мл.
         Серологическая  идентификация
         ИФ. Используют прямой и непрямой варианты при исследовании мазков крови и измененных органов, краткосрочных и перевиваемых культур крови и тканей. Непрямой вариант испытывали на концентрате с 80% живых лейкоцитов. В качестве AT применяли сыворотку больной лейкозом коровы и меченную ФИТЦ кроличью сыворотку против глобулинов быка. При микроскопии препаратов отмечена флюоресценция на поверхности лимфоцитов в виде яркого светящегося кольца или кольца из пунктиров. В препаратах из лейкоцитов здоровых животных подобного свечения не наблюдается или оно слабо выражено в некоторых клетках Для объективной оценки препаратов рассчитывается индекс флюоресценции (ИФ) по формуле ИФ = (А - В) : А, где А - процент несветящихся клеток в контроле; В - процент несветящихся клеток в опыте. Положительной считается реакция, если ИФ свыше 0,2 ; сомнительной - 0,11-0,2; отрицательной - ниже 0,1.
         Серодиагностика и ретроспективная  диагностика. У животных, зараженных ВЛКРС, вырабатываются AT к вирусным АГ, которые выявляются с помощью серологических реакции. Характерной особенностью инфекции ВЛКРС у КРС является, как правило, пожизненная персистенция вируса и вирусспецифических AT у больного животного. Поэтому серологические методы обнаружения специфических сывороточных AT являются наиболее практичными, экономичными и широко используемыми в диагностике онковирусной инфекции у КРС. Серологическими методами ВЛКРС можно выявлять у животных старше 6 нес, так как у телят, выпаиваемых молозивом и молоком инфицированных ВЛКРС матерей, появляются пассивно приобретенные материнские AT, которые могут персистировать до 6-мес. возраста. У зараженных животных в крови циркулируют AT к нескольким структурньм белкам вируса. Однако диагностическое значение имеют AT против gp51 и р24 ВБЛ. Количественные соотношения AT анти-р24 и анти-gр51 могут коррелировать со стадией инфекционного процесса, но при этом, AT к gp51 появляются раньше и содержатся в более высоком титре, чем антитела к р24 и, следовательно, серологические реакции, направленные на выявление aimi-gp51 - AT по со своей чувствительности будут превосходить аналоги, в которых используется в качестве АГ р24.
         В научно-исследовательских лабораториях для обнаружения специфических  AT используются РН, подавления раннего и позднего поликариоцитоза, нейтрализации псевдотипов и радиоиммуноанализ (РИА). Однако, для эпизоотологического обследования, контроля и борьбы с ВБЛ-инфекцией широко применяют РИД и ИФА, для постановки которых выпускаются соответствующие коммерческие диагностические наборы. Все вышеперечисленные методы предназначены для выявления AT в индивидуальных пробах сыворотки. Для обнаружения AT в низких титрах, например, в индивидуальных пробах молока или в сывороточных пулах, иди в образцах, полученных из молочного танка, требуется высокая чувствительность РИА или ИФА. Разработан ряд серологических реакций для диагностики инфекции, таких как РИФ, РСК, РДП в геле, реакция агглютинации латекса (РАЛ), ELISA, РНГА и реакция нейтрализации псевдотипа (РНПТ).
         РАЛ. В качестве теста для прижизненной диагностики лейкоза КРС можно использовать иммунохимическую реакцию агглютинации с латексом в соответствии с временными методическими рекомендациями Животные, сыворотки крови которых дали положительную реакцию агглютинации с латексом, подлежат тщательному обследованию на лейкоз другими методами. Данная реакция перспективна для прижизненной диагностики лейкозов Испытание этой реакции показало в 67% случаев совпадение результатов с гематологическими и около 90% с гистологическими методами диагностики гемобластозов КРС.
         ИФ. Менее широко применяют для обнаружения AT в сыворотках крови инфицированных животных. При этом используют в качестве клеток-мишеней перевиваемые культуры, хронически инфицированные ВЛКРС.
         РНГА. Является чувствительным методом обнаружения AT в сыворотке крови и молоке Рекомендуют использовать при экспертизе и санитарной оценке молока Наибольший процент совпадений гематологических показателей с результатами серологических исследований был отмечен в РНГА.
         ELISA. Широко применяют в США, Бельгии с использованием монАТ для широкомасштабного выявления энзоотического лейкоза в стадах КРС. Чувствительность его выше чем РДП. Метод ELISA при диагностике лейкоза КРС может существенно повысить чувствительность серодиагностики по сравнению с РДП Он удобен для систематического контроля молока коров благополучных хозяйств.
    Существующие  варианты ИФА включают 5 принципиальных этапов постановки реакции.
         Аллергическая реакция. Разработан аллерген для диагностики лейкоза у животных. Для проведения аллергических реакций наиболее подходящее место хвостовая складка у овец и КРС и дорсальная поверхность уха у свиней.
         Дифференциальный  диагноз. Лейкоз необходимо отличать от актиномикоза, туберкулеза, паратуберкулеза и бруцеллеза. При актиномикозе поражаются, главным образом, лимфатические узлы головы и грудной области (подчелюстные, заглоточные, околоушные и др.). Они плотной консистенции, с инкапсулированными абсцессами. В центре актиномикозного ума (гранулемы) гистологически обнаруживают друзы гриба. При туберкулезе чаще пораженш в виде узелков, имеющих специфическое гистологическое строение, находятся в легких, кишечнике. Для паратуберкулеза характерно наличие изменений в кишечнике и брыжеечных лимфатических узлах. В кишечнике развиваются продуктивное воспаление и очаговые инфильтраты из эпителиоидных клеток, в результате чего стенка утолщается в 5 и более раз. В лимфатических узлах отмечают обширные скопления из эпителиоидных элементов с наличием среди им гистиоцитов и клеток типа Лангерганса. Специфическим методом окраски выявляют бактерии паратуберкулеза, локализующиеся в эпителиоидных и гигантских клетках. Бруцеллез диагностируют с помощью РСК, РА и аллергической пробы.
    и т.д.................


Перейти к полному тексту работы


Скачать работу с онлайн повышением уникальности до 90% по antiplagiat.ru, etxt.ru или advego.ru


Смотреть полный текст работы бесплатно


Смотреть похожие работы


* Примечание. Уникальность работы указана на дату публикации, текущее значение может отличаться от указанного.