На бирже курсовых и дипломных проектов можно найти образцы готовых работ или получить помощь в написании уникальных курсовых работ, дипломов, лабораторных работ, контрольных работ, диссертаций, рефератов. Так же вы мажете самостоятельно повысить уникальность своей работы для прохождения проверки на плагиат всего за несколько минут.

ЛИЧНЫЙ КАБИНЕТ 

 

Здравствуйте гость!

 

Логин:

Пароль:

 

Запомнить

 

 

Забыли пароль? Регистрация

Повышение уникальности

Предлагаем нашим посетителям воспользоваться бесплатным программным обеспечением «StudentHelp», которое позволит вам всего за несколько минут, выполнить повышение уникальности любого файла в формате MS Word. После такого повышения уникальности, ваша работа легко пройдете проверку в системах антиплагиат вуз, antiplagiat.ru, etxt.ru или advego.ru. Программа «StudentHelp» работает по уникальной технологии и при повышении уникальности не вставляет в текст скрытых символов, и даже если препод скопирует текст в блокнот – не увидит ни каких отличий от текста в Word файле.

Результат поиска


Наименование:


курсовая работа Усилители биопотенциалов

Информация:

Тип работы: курсовая работа. Добавлен: 11.10.2012. Сдан: 2011. Страниц: 28. Уникальность по antiplagiat.ru: < 30%

Описание (план):


СОДЕРЖАНИЕ
Введение……………………………………………………………………….......3
    История возникновения усилителей биопотенциалов.……………………..5
    Известные технические решения усилителей биопотенциалов…………...6
    Возникавшие технические противоречия и пути их преодоления……….17
    Историческое совершенствование усилителей биопотенциалов путем ликвидации их недостатков…………………………………………………23
Заключение……………………………………………………………………….28
Список  литературы……………………………………………………………....29
Приложение  А. Патентный поиск………………………………………………30 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

     ВВЕДЕНИЕ
     За  последние 20 лет уровень применения компьютеров в медицине чрезвычайно  повысился. Практическая медицина становится все более и более автоматизированной.
     Использование различных средств и методов  анализа, реализуемых электронными устройствами, позволяет существенно расширить пределы медицинского исследования и заметно уменьшить вероятность ошибки при диагностике.
     Современные электронные устройства, применяемые  в медицине, представляют собой сложные  комплексы, которые состоят из датчиков, а иногда и системы датчиков, электронных усилителей, функциональных преобразователей, регистрирующих, вычислительных и управляющих устройств, устройств памяти, предварительной обработки и отображения информации. Сложные современные исследования немыслимы без применения вычислительной техники. Количество информации, которое получается при таких исследования так огромно, что без компьютера человек был бы неспособен ее воспринять и обработать.
     С помощью вычислительной техники  уже сейчас возможно существенно  усовершенствовать методику регистрации, хранения и извлечения различного рода информации, получить ряд новых данных, недоступных ручным методам анализа, преобразовывать эти данные в визуализированные и пространственные образы, открывающие дополнительные возможности локальной диагностики.
     В живых организмах информацию о состоянии  различных исследуемых участков и их функционировании передают биоэлектрические потенциалы, возникающие за счет разности зарядов на двух отдельно взятых точках.  
     Биопотенциал  – это обобщенная характеристика взаимодействия зарядов, находящихся в исследуемой живой ткани, например, в различных областях мозга, в клетках.
     В медицине измерение биопотенциалов применяется в таких методах  обследования, как электроэнцефалография, электромиография, в лабораторных исследованиях и многих других. Для усиления мощности электрических сигналов различной формы и амплитуды, полученных от регистрируемых биопотенциалов, находящихся в живой ткани, используют усилители. [7] 

    ИСТОРИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ  УСИЛИТЕЛЕЙ БИОПОТЕНЦИАЛОВ
      Систематическое изучение биопотенциалов было начато немецким физиологом Э. Дюбуа-Реймоном в 1848, который доказал существование  биопотенциалов в нервах и мышцах в покое и при возбуждении. Но ему не удалось зарегистрировать быстрые, длящиеся тысячные доли секунды колебания биопотенциалов при проведении импульсов вдоль нервов и мышц из-за большой инерционности гальванометра.
      В 1886 немецкий физиолог Ю. Бернштейн проанализировал  форму потенциала действия, а французский учёный Э. Ж. Марей в 1875 году применил для записи колебаний потенциалов бьющегося сердца капиллярный электрометр; русский физиолог Н. Е. Введенский в 1883 году использовал для прослушивания ритмических разрядов импульсов в нерве и мышце телефон, а голландский физиолог В. Эйнтховен в 1903 году ввёл в эксперимент и клиническую практику струнный гальванометр - высокочувствительный и малоинерционный прибор для регистрации электрических токов в тканях. Значительный вклад в изучение биопотенциалов в 1913-1921 годах внесли русские физиологи: В. В. Правдич-Неминский впервые зарегистрировал электроэнцефалограмму, а А. Ф. Самойлов исследовал природу нервно-мышечной передачи возбуждения, Д. С. Воронцов в 1932 году открыл следовые колебания биопотенциалов, сопровождающие потенциал действия в нервных волокнах. [9]
      Прогресс  в изучении биопотенциалов был тесно  связан с успехами электроники, позволившими применить в физиологическом эксперименте электронные усилители и осциллографы (работы американских физиологов Г. Бишопа, Дж. Эрлангера и Г. Гассера в 30-40-х гг. 20в.). [7] 
 

      ИЗВЕСТНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ РЕШЕНИЯ УСИЛИТЕЛЕЙ БИОПОТЕНЦИАЛОВ
     Усилителем называется устройство, при помощи которого производится регистрация и усиление биопотенциалов. Обычно усилитель состоит из предусилительной головки и блока регистрации. Предусилительная головка необходима для согласования электрического сопротивления объекта и микроэлектрода, а также для разделения электрических цепей объекта и усиливающей аппаратуры. Предусилительная головка крепится на микроманипуляторе и к ней через держатель электродов присоединяется регистрирующий электрод. В предусилителе сигнал от биологического объекта усиливается и передается по проводам в блок регистрации усилителя. В блоке регистрации усилителя осуществляется дальнейшее усиление биопотенциалов до величин, достаточных для визуального наблюдения на экране осциллографа или мониторе компьютера. [1]
     Существует  несколько основных видов электрофизиологических усилителей. Выбор типа усилителя  следует производить в зависимости от методического подхода решения конкретной экспериментальной задачи. При помощи некоторых усилителей можно проводить несколько типов измерений, но в основном только в рамках той методики, для которой он был разработан.  
      К сожалению, не существует полностью универсального усилителя, который бы мог решать все задачи поставленные пред современным электрофизиологом. Поэтому выбор усилителя достаточно серьезная задача для исследователя. В настоящее время доступен достаточно широкий спектр усилителей от разных производителей. Можно выделить несколько основных видов усилителей.
 

     Усилители внутриклеточные  
     Регистрация электрических процессов на клеточных  мембранах возможна с помощью  острых стеклянных микроэлектродов (микропипеток), вводимых в клетку. Такой тип регистрации в основном применяется при исследовании процессов протекающих в целой клетке, которая имеет, как правило, различные типы белков и транспортёров (мышечные клетки, ооциты, крупные нейроны беспозвоночных и т.п.).
     Техника с одним внутриклеточным электродом позволяет измерять разность потенциалов или ток, но не даёт возможности фиксировать их на определенном уровне, так что во время исследования одновременно меняются оба параметра.
     Такого  типа регистрация позволяет оценивать  мембранный потенциал клеток, амплитуду регистрируемых сигналов, но не может давать корректную информацию об их временных характеристиках. Как правило, усилители для такого вида отведения не дороги и просты в обращении. Усилители для одноэлектродной регистрации могут быть многоканальными, в этом случае регистрация может проводиться не зависимо по нескольким каналом. Несмотря на ограничения, одноэлектродного отведения в некоторых случаях бывает достаточно для решения многих экспериментальных задач.
     Техника с двумя внутриклеточными микроэлектродами позволяет фиксировать потенциал клетки на определенном уровне, что позволяет корректно оценивать ток, проходящий через мембрану клетки. В этом случае один из электродов служит для регистрации потенциала, а другой для инъекции тока.
     Этот  метод имеет большое преимущество перед одноэлектродным отведением, поскольку в этом случае, есть возможность  корректно оценивать амлитудно-временные  характеристики сигналов, оценивать  время работы каналов, емкостные  свойства мембраны, строить вольтамперные характеристики и т.д. Усилители для такого вида исследований более сложные и более дорогие. Как правило, усилители, предназначенные для фиксации потенциала могут работать в режиме регистрации потенциала, т.е. их можно так же использовать для простейших экспериментов с одним электродом. Многие фирмы выпускают специализированные усилители для работы с определенным видом клеток (ооциты, мышечные клетки)
     Существует  также методика фиксации потенциала через один электрод. В этом случае и измерение потенциала и инъекция тока осуществляется через один и тот же электрод посредством быстрого переключения режимов.
     Такого  вида отведение бывает полезно, когда  существуют методические трудности  при введении двух электродов(клетки малы по размеру, спонтанные сокращения клеток и т.п.) Но такой метод имеет существенные ограничения по временным характеристикам регистрируемых сигналов, поскольку время необходимое, для переключения режимов может быть сравнимо с параметрами измеряемых сигналов.
     На  что нужно обратить особое внимание при выборе внутриклеточного усилителя:
     Входное сопротивление усилителя должно быть не менее, чем в 1000 раз больше сопротивления рабочего электрода;
     Убедиться, что параметры регистрируемого  сигнала укладываются в диапазон усилителя.
     Компенсация емкости и частотные фильтры существенно облегчают работу.
     Наличие специального режима прокола облегчит введение электрода в клетку.
     Возможность инъекции тока дают усилителю некоторый  контроль над возбудимостью исследуемой  клетки.
     Убедиться, что величина регистрируемого сигнала после усиления (на выходе прибора) укладывается в диапазон Вашего самописца, регистратора или АЦП.
     Обратить  внимание на количество каналов, если есть необходимость вести регистрацию  в многоканальном режиме.
     Усилитель Модели 1600 Neuroprobe Amplifier - высокоточный микроэлектродный усилитель, специально разработанный для проведения внутриклеточных нейрофизиологических исследований. Это отдельное устройство обеспечивает многофункциональность, точность и простоту операций, и не требует вспомогательного оборудования.
    Цифровая панель отображает величину мембранного потенциала, инжектируемого тока и сопротивления электрода.
    Генератор прямоугольных импульсов используется для оценки параметров электродов и компенсации емкости.
    Система инжекции тока с шагом (точностью) 0.1 нА (максимум - 1 мкА) позволяет одновременно проводить стимуляцию и регистрацию с помощью одного электрода.
    Раздельное управление балансом для импульсов и постоянного тока
    Встроенные фильтр нижних частот и узкополосный режекторный фильтр.
     
    Рисунок 1 – внутриклеточный усилитель  модели 1600 Neuroprobe Amplifier
     Усилители ВА обладают широкой полосой частот и подходят для внутриклеточных  записей в режиме фиксации потенциала с помощью острых микроэлектродов, перфорированного патч клампа или патч клампа в конфигурации целая клетка. Эти усилители так же подходят для электропорации и ионтофореза.
     Усилитель BA-01X это стандартный мостовой усилитель для внутриклеточных записей в режиме фиксации тока. Обладая расширенным диапазоном токов (x10, например +/. 120 нA макс.), этот усилитель может быть использован для электропорации одельных клеток и их неинвазивного джакстаклеточного заполнения клеток красителями или плазмидами.
     Усилитель BA-03X имеет дополнительо фильтры высоких и низких частот записываемого потенциала и коэффициент усиления до 1000. Поэтому он может быть использован и для внеклеточных записей.
     
Рисунок 2 - усилитель ВА
     Усилители внеклеточные 
     Метод внеклеточной регистрации  - это методика, при которой микроэлектрод не прокалывает мембрану клетки, а плотно прижимается к ней. Кончики внеклеточных электродов не острые а закругленные, их диаметр может достигать нескольких десятков микрометров.
     В некоторых случаях микроэлектроды для внеклеточной регистрации изготовляют из металла покрытого изолирующим составом а и иногда вместо стекла для вытягивания электродов используют пластик. Такие электроды можно использовать многократно.
     При внеклеточном отведении регистрируются локальные токи, проходящие через мембрану, т.е. можно измерять аплитудно-временные параметры сигналов без фиксации потенциала. В отличие от методики фиксации потенциала при которой сигнал регистрируется от всей клетки в целом, в случае внеклеточной регистрации сигналы отводятся локально, только от той области которую накрывает электрод.
      В отличии от patch-clamp регистрации в случае внеклеточного отведения обычно не удается получить плотного контакта с мембраной. В связи с этим таким методом можно регистрировать токи только относительно большой величины. Эта методика используется в основном в тех случаях когда метод patch-clamp не работает (поверхность клеток покрыта соединительной тканью и т.п.).
     Принципиально внеклеточные усилители не отличаются от внутриклеточных усилителей для регистрации потенциалов. Но входные характеристики регистрирующей головки должны быть достаточно хорошие (соотношение сигнал шум, входная емкость и.т.п.) в связи  с тем, что амплитудно-временные параметры отводимых токов отличаются от внутриклеточных потенциалов.
     Внеклеточные токи меньше по амплитуде и имеют более быстрые передние фронты. Зачастую внеклеточные усилители имеют встроенный фильтр по постоянному току, что делает невозможным использование их для внутриклеточных экспериментов.
     На  что нужно обратить особое внимание при выборе внеклеточного усилителя:
     Входное сопротивление усилителя должно быть не менее, чем в 1000 раз больше сопротивления рабочего электрода.
     Убедиться, что параметры регистрируемого  сигнала укладываются в диапазон усилителя.
     Для корректной регистрации быстрых сигналов необходимо наличие компенсация емкости электрода
     Убедиться, что усилитель может работать с теми электродами, которые вы собираетесь  использовать (высокоомные или низкоомные).
     Наличие измерителя сопротивления электрода  позволяет оценивать качество электрода.
     Калибратор  позволяет контролировать параметры  регистрирующего электрода.
     Возможность инъекции тока позволяет ионофоретически  апплицировать вещества через электрод.
     Убедиться, что величина регистрируемого сигнала  после усиления (на выходе прибора) укладывается в диапазон Вашего самописца, регистратора или АЦП.
     Обратить  внимание на количество каналов, если есть необходимость вести регистрацию  в многоканальном режиме.
     Внеклеточный  усилитель биопотенциала ЕХТ-02F оснащен двумя дифференциальми входами с высоким сопротивлением входа через гнезда штекерого типа (Banana jacks), байонетные разъемы (BNC) или (по требованию) поставляется с внешними преобразователями входного сопротивления.
     Напряжение  сигнала на выходе может считываться  в режиме переменного тока (с усилением до х1000), либо в режиме постоянного тока с десятикратным усилением. ЕХТ-02F оформлен в настольный металлический корпус и снабжен внешним источником питания.
     Контроль  за параметрами усилителя облегчается  наличием двух светодиодных индикаторов, которые указывают на выход усилителя из линейного режима, а также аналоговым монитором баланса усилителя. Кроме того, ЕХТ-02F снабжен аудиомонитором что позволят контролировать записываемый сигнал акустически. ЕХТ-02F также производится в одноканальной версии.
     
Рисунок 3 - внеклеточный усилитель биопотенциала ЕХТ-02F
     Дифференциальные  усилители серии DP-300 для постоянного/переменного  тока предназначены для записи ЭЭГ, ЭКГ и регистрации внеклеточных сигналов.
     Особенностями этих усилителей являются высокое входное сопротивление, высокая степень подавления синфазных сигналов [100 dB ; 60 Hz], низкий уровень шума, высокая степень усиления, высокая устойчивость к постоянному току и фильтрация полосы частот.
     
Рисунок 4 - Дифференциальный усилитель DP-301 (одноканальный)
     
Рисунок 5 - Дифференциальный усилитель DP-304 (четырехканальный)
     Модульная система EPMS-07 предназначена для измерения  и/или обработки биоэлектрических сигналов в электрофизиологических экспериментах и испытаниях фармакологически активных веществ.
     Возможные компоненты системы EPMS-07:
    Усилители внутриклеточных сигналов
    Усилители внеклеточных сигналов
    Усилитель ELC (Extracellular loose clamp amplifier)
    Модули для фильтрации/обработки сигнала
    Коммутационные модули (“breakout box” modules)
    Измерители напряжения и тока
    Изолятор стимулирующих импульсов
    Модуль для введения химических веществ
    Модуль усилителя высокого напряжения
    Модуль для пермеабилизации клеток (“cell penetration module”)
    Таймер
    Звуковой монитор
    Измеритель сопротивления электродов
     
Рисунок 6 - модульная система EPMS-07
     Усилители для patch-clamp 
     Метод локальной фиксации потенциала, patch-clamp (англ. patch - заплатка, clamp здесь - захват, фиксация) - электрофизиологическая методика для изучения свойств ионных каналов, состоящая в том, что фрагмент клеточной мембраны изолируется с помощью специальной пипетки. Эта методика дает возможность экспериментатору контролировать разность потенциалов между сторонами мембраны, а также помещать ее в среду с определенным химическим составом.
     В этих хорошо контролируемых условиях измеряют ионные токи, проходящие через  мембрану, что, в конечном итоге, позволяет  делать выводы о том, как ионные каналы реагируют на электрическое и  химическое воздействие.
     Метод настолько чувствителен, что позволяет наблюдать поведение и химические превращения единичных молекул, взаимодействующих с мембраной.
     Ключевые  параметры, на которые  стоит обратить внимание при выборе прибора:
     Соответствие      возможностей усилителя методам, которые Вы планируете использовать.
     Обратить      внимание, что к выбранному усилителю имеются подходящие головки.
     Убедиться,      что диапазон фиксации напряжения и компенсация потенциала пипетки      достаточны для Ваших задач.
     Обратить      внимание на предельные возможности компенсации емкости и сопротивлений.
     Убедиться      в совместимости прибора с уже имеющимся оборудованием.  
 
 
 
 
 

    ВОЗНИКАВШИЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ПРОТИВОРЕЧИЯ И ПУТИ ИХ ПРЕОДОЛЕНИЯ
     Фиксация  трансмембранного потенциала позволяет измерять мембранную проводимость по изменениям тока при постоянном напряжении. Суть метода состоит в следующем. В клетку вводятся два электрода, ещё один — электрод сравнения — остаётся вне клетки. Первый внутриклеточный электрод служит для измерения трансмембранной разности потенциалов (то есть разности потенциалов между ним и электродом сравнения), второй может подавать ток.
     Специальное устройство — генератор сигнала — задаёт командный потенциал, которому должен быть равен трансмембранный потенциал.
     Измеренный трансмембранный потенциал подаётся через усилитель на вход устройства сравнения, которое вычитает измеренный потенциал из командного и, в зависимости от величины разности, подаёт ток на токовый электрод так, чтобы скомпенсировать эту разницу. Монитор тока, в свою очередь, постоянно измеряет величину тока, которая для этого необходима. [4]
     В конце семидесятых годов XX в. Эрвин Неер (E.Neher) и Берт Сакман (B.Sakmann) обнаружили, что конусообразные стеклянные пипетки с диаметром кончика 1—2 микрона могут образовывать контакты с клеточной мембраной (границе «мембрана — стекло») с сопротивлением в несколько гигаом — это так называемый гигаомный контакт. Он позволяет изолировать от внешней среды и от остальной части мембраны тот её фрагмент, который находится внутри пипетки. Отграниченный пипеткой фрагмент мембраны и называется patch — «фрагмент», слово clamp (фиксация). В пипетку, заполненную раствором электролита, помещается хлор-серебряный электрод, второй электрод размещается внеклеточно, в омывающей жидкости.
     
     Рисунок 7 - Блок управления patch-clamp установкой. На мониторе видна пипетка, касающаяся поверхности клетки
     Огромная  сфера, часть которой видна на мониторе в центре фотографии — это клетка (ооцит лягушки Xenopus laevis), находящийся в данный момент на предметном столике микроскопа, к нему подведена patch-пипетка, её диаметр у носика — около 3 микрон. После установления гигаомного контакта она изолирует фрагмент мембраны.
     Если  по условиям эксперимента необходимо менять состав внеклеточной среды, можно  использовать конфигурацию whole cell («англ. целая клетка»). В этом случае пипетку не отводят от клетки, а подают в неё отрицательное давление и таким образом разрушают изолированный фрагмент мембраны.
     
     Рисунок 8 -  Принципиальная схема patch-clamp в конфигурации whole-cell.
     Поскольку клетка обычно маленькая, то, благодаря диффузии, состав цитоплазмы вскоре оказывается идентичным составу пипеточного раствора. Отметим, что если в конфигурации inside-out пипеточный электрод был «внеклеточным», а внутренний — «внутриклеточным», то теперь они поменялись ролями. С точки зрения изучения тока через каналы, преимущество этого метода состоит в том, что здесь оказываются сохранны клеточные структуры и регуляторные механизмы. Но при таком методе есть и недостаток — возможно измерить только суммарный ток всех каналов в клетке, а не токи через одиночные каналы.
     Решить  эту проблему позволяет  конфигурация outside-out (наружная сторона снаружи). Если после перехода в whole-cell mode медленно отводить пипетку от клетки, мембрана не отрывается сразу, а начинает вытягиваться в трубку — это видно на рисунке 9.
     
Рисунок 9 - Начальная фаза перехода из Whole-cell в Outside-out.
     Perforated patch («перфорированный patch»[7])— это специфический вариант patch-clamp в whole-cell mode. В данном случае, в пипеточном растворе содержится небольшое количество специального антибиотика. Антибиотики этого класса формируют ионные каналы в клеточной мембране на участке, присоединённом к микропипетке.
     Такой подход позволяет  избежать замещения  внутренней среды  клетки раствором  из пипетки-электрода, то есть клетка остаётся живой с минимальными, насколько это  возможно, повреждениями. Таким образом, ответы клетки на раздражители являются максимально  приближёнными к естественным.
     В то же время, данному  методу присущ ряд  недостатков. Во-первых, по сравнению с  классическим whole-cell mode, входное электрическое сопротивление (которое состоит главным образом из сопротивления пипетки и сопротивления в месте соединения пипетки с мембраной) является значительно более высоким.
     Это понижает качество фиксации потенциала, повышает уровень шума при  записи, и увеличивает  значения всех ошибок, связанных с изменениями  сопротивления полной цепи (от электрода  во внешнем растворе до электрода в  пипетке). Во-вторых, для того, чтобы антибиотик подействовал, требуется довольно много времени (до 30 минут), что существенно уменьшает полезный период эксперимента. И, в-третьих, антибиотик повреждает мембрану также и в месте соединения с кончиком пипетки, что приводит к ускоренному разрушению гигаомного контакта и дополнительно уменьшает эффективное экспериментальное время. Чтобы решить данную проблему, данный вариант метода используют только в экспериментах, которые не требуют продолжительного времени для изучения исследуемых явлений.
     Метод Port-a-Patch, в котором используется измерительний  прибор, насос, усилитель и компьютер. Планарное сооружение помещается на стол, метод показан на рисунке 10.
     
Рисунок 10 – установка при методе Port-a-Patch
     Это метод, разработанный для увеличения производительности в электрофизиологии, когда требуются массовые измерения трансмембранной проводимости. В частности, этот метод находит применение в фармакологических исследованиях.
     Если  при классическом patch-clamp пипетка  позиционируется на неподвижной  клетке, то при планарном, напротив, клеточная суспензия наносится на микрочип с упорядоченными отверстиями субклеточного диаметра. Клетка оседает на отверстие, с помощью насоса подсасывается к нему, в результате чего формируется гигаомный контакт. Далее исследование проводится по тому же принципу, что и в традиционном patch-clamp.
     Основное  преимущество планарного patch-clamp состоит в том, что эксперимент  выполняется значительно  проще, требует меньшей  квалификации от исследователя  и занимает меньше времени. Достаточно много измерений  может быть выполнено одно за другим в автоматическом режиме. По утверждению авторов методики, этот метод позволяет легче осуществлять перфузию внутриклеточного содержимого, а также более точно дозировать исследуемые или тестовые фармакологические вещества. С помощью этого метода относительно легко работать с клетками, обычно находящимися во взвешенном состоянии — в частности, с клетками крови.
     Вместе  с тем, метод планарного patch-clamp имеет ряд существенных ограничений. Основное состоит в том, что исследуемые  клетки должны находиться в суспензии. Соответственно, не существует возможности работать с фрагментами ткани, невозможно изучать взаимодействие клеток друг с другом. Для мобилизации клеток необходимо использовать ферменты-протеазы, которые могут модифицировать поведение изучаемых ионных каналов.
и т.д.................


Перейти к полному тексту работы


Скачать работу с онлайн повышением уникальности до 90% по antiplagiat.ru, etxt.ru или advego.ru


Смотреть полный текст работы бесплатно


Смотреть похожие работы


* Примечание. Уникальность работы указана на дату публикации, текущее значение может отличаться от указанного.